Comunità microbiche che incidono sul patrimonio fotografico dell'albume: un'indagine metodologica | rapporti scientifici

Comunità microbiche che incidono sul patrimonio fotografico dell'albume: un'indagine metodologica | rapporti scientifici

Anonim

Soggetti

  • Comunità microbiche
  • Ecologia
  • Scienza dei materiali

Astratto

Questo studio è una delle poche indagini che analizzano le stampe di albume, forse il patrimonio fotografico più importante della fine del XIX e all'inizio del XX secolo. La composizione chimica dei campioni fotografici è stata valutata utilizzando la spettroscopia infrarossa a trasformata di Fourier e la fluorescenza a raggi X. Queste due tecniche non invasive hanno rivelato la complessa natura delle stampe all'albume, che sono composte da una miscela di proteine, cellulosa e sali. Il campionamento microbico è stato eseguito utilizzando membrane di nitrato di cellulosa che hanno anche permesso di osservare la microflora intrappolata con un microscopio elettronico a scansione. L'analisi microbica è stata eseguita utilizzando la combinazione di approcci dipendenti dalla coltura (coltivazione in diversi media, incluso un NaCl al 3%) e approcci indipendenti dalla coltura (clonazione e sequenziamento batterici e fungini). I microrganismi isolati sono stati sottoposti a screening per le loro attività lipolitiche, proteolitiche, cellulolitiche, catalasi e perossidasi. La combinazione delle tecniche dipendenti dalla cultura e indipendenti con i saggi enzimatici ha rivelato una sostanziale diversità microbica con diversi microrganismi deteriogeni provenienti dai generi Bacillus , Kocuria , Streptomyces e Geobacillus e dai ceppi fungini Acrostalagmus luteoalbus , Bjerkandera adusta , Pleurotus pulothecum e Trichumum roseum .

introduzione

Nell'era digitale è molto semplice scattare una foto con una moderna fotocamera digitale ed è altrettanto facile stamparla con metodi di stampa sempre più recenti e più rapidi. Ma fino all'ultimo decennio del XX secolo, non era così semplice e le fotografie venivano stampate su carta fotografica speciale, composta da un'emulsione sensibile alla luce contenente sali di alogenuro d'argento sospesi in un materiale colloidale, solitamente gelatina, rivestito su un carta, carta con rivestimento in resina o supporto in poliestere 1 .

Dalla metà del XIX secolo all'inizio del XX secolo, il materiale colloidale più comunemente usato era l'albume. Le fotografie di albumi furono inventate intorno al 1850 da un fotografo francese, Louis Désiré Blanquart-Evrard. In queste fotografie, un foglio di carta era coperto da uno strato di albume, un tipo di proteina presente negli albumi, al fine di legare i sali di alogenuro sensibili alla luce sulla carta; divennero la forma dominante di positivi fotografici dal 1855 al volgere del XX secolo, raggiungendo un picco negli anni 1860-1890. L'uso della carta di albume è notevolmente diminuito intorno all'anno 1920 2 .

Molte fotografie a base di albume devono esistere negli archivi, nelle gallerie e nei musei di tutto il mondo, sia in esposizione che in deposito, e molte di esse fanno parte di importanti collezioni storiche; come gli altri oggetti storici di queste collezioni, anche loro devono essere salvaguardati dai processi di invecchiamento e biodeterioramento. È già noto quanti microrganismi, principalmente funghi, attaccano vari tipi di materiali d'archivio, tra cui libri, pergamene e materiali fotografici 3, 4, ma, sebbene molti studi siano stati condotti per indagare sulla microflora responsabile del deterioramento di diversi materiali conservati negli ambienti interni 3, 4, 5, pochi hanno esaminato il biodeterioramento dei materiali fotografici e la maggior parte di quelli che si sono concentrati solo su fotografie a base di gelatina 6, 7, 8, 9, 10 .

Una strategia metodologica per valutare il biodeterioramento delle fotografie di albume, una delle più preziose "raccolte di ricordi" del XIX e XX secolo, è gravemente carente.

In questo studio abbiamo analizzato la composizione materiale e la microflora presenti in due fotografie di albume. La spettroscopia infrarossa a trasformata di Fourier (FTIR) e la fluorescenza a raggi X (XRF), utilizzate per studiare il materiale, sono state combinate con microscopia elettronica a scansione (SEM), analisi microbiche dipendenti dalla cultura e indipendenti dalla cultura e diversi saggi di agar biodegradativi al fine di valutare la natura dei contaminanti microbici.

risultati

Osservazione microscopica e analisi chimica

Un'osservazione preliminare di varie parti delle due stampe dell'albume è stata fatta usando un microscopio stereo. Nella fotografia di Gyula (Fig. 1a) era evidente la presenza di contaminazione da funghi e diverse impurità sulla sua superficie vicino alle aree di campionamento (Fig. 1b, c). Le membrane di nitrato di cellulosa sono state utilizzate per sollevare contaminanti microbici e (prevalentemente) fungini dalle aree indicate della fotografia (cerchi rossi, Fig. 1a) e la loro presenza è stata confermata dall'analisi SEM di una piccola porzione di membrana (Fig. 1d, e). Nessuna contaminazione microbica può essere chiaramente vista sulla stampa antiquaria (Fig. 2a) usando lo stereo microscopio (Fig. 2b), ma l'osservazione SEM ha rivelato la presenza di ife sulla superficie della fotografia (Fig. 2c, d).

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( a ) La superficie dell'albume è di 9, 7 × 13, 9 cm; la dimensione della fotografia completa compreso il cartone è 10, 8 × 16, 2 cm. I siti di campionamento microbico sono contrassegnati da due cerchi rossi. I siti F0 – F4 sono stati sottoposti all'analisi FTIR, mentre le lettere XA – XC indicano i siti in cui sono state eseguite le misurazioni XRF. ( b, c ) Immagini al microscopio stereo con un ingrandimento di 40 × (sito F4) e 20 × (area vicino al sito F4) rispettivamente. ( d, e ) Fotografie SEM che mostrano le ife e le spore fungine recuperate da una membrana di nitrato di cellulosa. La fotografia è stata fornita dall'Archivio Nazionale Slovacco e viene utilizzata con il permesso.

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( a ) La superficie dell'albume misura 10, 1 × 13, 9 cm; la dimensione della fotografia completa compreso il cartone è 10, 9 × 16, 6 cm. I numeri 1–6 indicano i siti in cui sono state eseguite le misurazioni FTIR, mentre i siti A – C sono stati sottoposti all'esame XRF. ( b ) Un'immagine al microscopio stereo 20 × del sito 6 ( c, d ) fotografie SEM del sito 2 in cui è evidente la presenza di ife fungine e possibili strutture minerali.

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La spettroscopia FTIR-ATR ha confermato che le due fotografie sono, in effetti, stampe su albumina. I picchi di assorbimento tipici per una fotografia di albume appaiono tra 1632 cm −1 e 1161 cm −1 e sono visibili in Fig. 3.

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La Figura 4 mostra due diversi spettri dalla stampa Gyula. Il picco più intenso nello spettro F0 (il campione di controllo) è a 1632 cm -1, corrispondente alla proteina Amide I, alle vibrazioni di allungamento C = O e CN del legame (principalmente) del peptide. Il picco a 1530 cm -1 appartiene all'Amide II, derivante dalla flessione NH e dalle vibrazioni di stiramento CN del legame peptidico Amide III è rappresentato dalla serie di picchi nell'intervallo 1400-1200 cm -1 -1 . Poiché gli strati di albumina sono depositati su supporti di carta in questo tipo di fotografie, i picchi nell'intervallo 1250–850 cm -1 indicano la presenza di cellulosa.

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Lo spettro μ-FTIR della colorazione foxing (F4) mostrava spostamenti delle bande Amide I e Amide II verso i wavenumbers più alti rispetto a F0 (Fig. 4). Lo spettro delle macchie di volpe mostrava il maggior numero di cambiamenti nel numero di picchi e nelle loro forme nella regione 1422–960 cm −1 e apparvero un numero di nuovi picchi (1736, 1406, 1362, 1319, 1286, 1231, 1195, 1097, 1048 e 961 cm −1 ). I gruppi funzionali corrispondenti a questi picchi sono descritti nella Tabella supplementare S1.

Un'analisi XRF della fotografia di Gyula (Fig. 1a; XA – XC) ha rilevato valori elevati di Ba e Ti in tutti e tre i siti analizzati (Tabella 1), suggerendo la presenza di solfato di bario e biossido di titanio. Il sito della volpe oscura (Fig. 1a; XC) conteneva una piccola quantità di argento che era stata utilizzata per creare l'immagine fotografica. Altri elementi rilevati nelle due macchie di volpe comprendono Ca, Fe e Sr. Il cartone della fotografia antiquaria (Fig. 2a; A) conteneva gli elementi Ag, Al, Fe, Cu, Mg e Zn (Tabella 1). Concentrazioni elevate di zolfo e silicio sono state rilevate anche in tutti i siti analizzati di questa fotografia. Il bromo era presente in entrambi i siti di volpe (B e C), mentre il sito di volpe oscura (C) conteneva anche Ag e Al.

Tabella a grandezza naturale

Strategia di coltivazione e microflora isolata

Per la coltivazione della microflora sono state utilizzate due diverse procedure di campionamento (inoculazione diretta e diluizione decimale) e diverse composizioni mediali (alcune contenenti NaCl al 3%). L'inoculazione diretta ha permesso di isolare solo alcuni ceppi fungini dalla fotografia di Gyula ( Penicillium chrysogenum P1_18_Fu, Chaetomium elatum P1_13_Fu e Pleurotus pulmonarius P1_15_Fu); i restanti ceppi fungini e batterici sono stati recuperati dall'inoculazione di 10 campioni diluiti. Sono state osservate differenze nel potere di isolamento dei media microbiologici standard utilizzati in questo studio (R2A e LB10; MEA e DRBC). In particolare, solo i due ceppi di Bacillus (P1_1_5 e P1_2_8) isolati da Gyula foto sono cresciuti su R2A e il 59% dei funghi è stato recuperato su DRBC. MEA era importante solo per l'isolamento dei penicilli e gli aspergillli recuperati (principalmente) dalla fotografia di antiquariato, ma la strategia di campionamento per questa foto includeva anche l'analisi di un pezzo di albume. È quindi possibile affermare che la diversità batterica dei campioni di fotografie di albume è stata espressa meglio su LB10 e la diversità fungina su DRBC. Il mezzo con NaCl al 3% ha permesso di isolare diversi ceppi fungini, solo uno dei quali, il Trichothecium roseum (PF1_2_Fu), è stato anche isolato su DRBC. Gli altri, Mucor plumbeus (P1_Na_18_Fu), Pleosporales sp. (P1_Na_21_Fu), Cephalosporium sp. (PF1_Na_8_Fu) e Cladosporium macrocarpum (PF1_Na_30_Fu), sono stati isolati solo su terreno salino, attestando il loro carattere leggermente alofilo. Solo due Actinobacteria halotolerant sono stati isolati, Kocuria sp. (PF1_Na_14) e Streptomyces albidoflavus (PF1_Na_10). Tutti i microrganismi leggermente alofili sono stati isolati dai campioni di fotografia di Gyula (Tabella 2).

Tabella a grandezza naturale

Solo pochi ceppi batterici sono stati isolati dai tre campioni (2 isolati dalla foto di Gyula, 7 dalla cornice di carta dell'album e 3 dalla fotografia di antiquariato). La maggior parte delle specie erano membri del genere Bacillus ed erano isolate dal substrato di albume di entrambe le fotografie. La microflora batterica isolata dalla cornice di carta conteneva Actinobacteria apparteneva ai generi Kocuria e Streptomyces (Tabella 2).

La comunità fungina era più diversificata della sua controparte batterica. La maggior parte dei funghi isolati apparteneva al phylum Ascomycota; i membri del phylum Basidiomycota, insieme a un singolo membro del subphylum Mucoromycotina, sono stati isolati solo dal substrato di albume della fotografia di Gyula. Il genere più comune era il penicillium e dalla fotografia antiquaria erano isolate solo penicillia e aspergilla. La diversità fungina della cornice della carta dell'album includeva anche membri del genere Cephalosporium , Trichothecium e Acrostalagmus (Tabella 2).

Indagine indipendente dalla cultura

Poiché non tutti i microrganismi nella comunità microbica possono essere isolati e coltivati, abbiamo anche estratto e sequenziato il DNA totale delle comunità per identificare quegli organismi che resistevano alla coltivazione. Il DNA batterico estratto apparteneva principalmente ai bacilli e ai gammaproteobatteri; diverse sequenze di Corynebacterium sono state rilevate dal campione del frame di carta dell'album, che rappresenta l'unico collegamento con la classe Actinobacteria. In particolare, i batteri più comuni trovati nei campioni della fotografia di Gyula appartenevano al genere Geobacillus che erano rispettivamente l'80% e il 76% della popolazione recuperata dalla superficie dell'albume (P1) e dalla cornice della carta dell'album (PF1). Alcune specie di Geobacillus sono state trovate solo sulla superficie dell'albume ( G. thermodenitrificans ) mentre altre erano presenti solo sulla cornice di carta ( G. kaustophilus ). Il terzo batterio più comune era Aeromonas hydrophila , trovato sia sull'albume che sull'album, mentre il DNA del Bacillus pumilus è stato rilevato solo sulla superficie dell'albume (Fig. 5a).

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Diversità batterica ( a ) ed eucariotica ( b ) su materiali fotografici rilevati usando l'approccio DGGE e la libreria dei cloni. P1: foto di Gyula dall'archivio nazionale slovacco; PF1: cornice in carta dell'album della foto di Gyula; PA2: fotografia antiquaria.

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La comunità batterica della stampa antiquaria (PA2) era nettamente diversa dalla fotografia di Gyula: qui gli OTU di Lactococcus lactis erano i più abbondanti, raggiungendo il 48%, seguiti dai OTU di Geobacillus ( G. kaustophilus e G. thermoleovorans ), con il 32% e Staphylococcus succinus e Shigella sp., 10% ciascuno (Fig. 5a; Tabella supplementare S2).

Sono state osservate differenze tra le comunità fungine della foto di Gyula e la cornice della carta dell'album: il DNA dei membri di Nectria e Malassezia si è verificato in entrambi i campioni, ma le OTU di Galactomyces candidum sono state rilevate solo sulla cornice di carta. Il materiale dell'albume mostrava la più grande divinità fungina, con Chaetomium , Cladosporium , Saccharomyces , Trichosporon , Geotrichum e Corynespora OTUs tutti rilevati (Fig. 5b; Tabella Supplementare S2).

La libreria di cloni di fotografia PA2 mostrava ancora un altro tipo di comunità fungina, composta principalmente da OTU di Aspergillus (38%) insieme a Eurotium halophilicum (22%), Gnomonia setacea (12%), Alternaria sp. (10%) e Cladosporium (8%). È stato anche rilevato il DNA dell'alga verde Trebouxia impressa (Fig. 5b; Tabella supplementare S2).

Va notato che questi approcci di clonazione e sequenziamento hanno permesso di determinare la composizione delle comunità microbiche che colonizzano le due fotografie, ma non indicano di per sé quali dei loro membri sono responsabili della biodegradazione.

Attività biodegadative, catalasi e perossidasi

Tutti i batteri isolati hanno mostrato significative attività di biodegradazione. I due ceppi di Bacillus che contaminano la fotografia di Gyula hanno rapidamente prodotto un alone molto intenso attorno alle colonie quando coltivato su Spirit Blue (attività lipasi) e rosso Congo (attività cellulase). Gli Actinobacteria dalla cornice della carta dell'album, membri del genere Kocuria e Streptomyces , esibivano forti proprietà lipolitiche e proteolitiche (ad eccezione di Kocuria rhizophila PF1_1, che era positivo solo per il saggio lipolitico). I tre Bacillus sp. isolato dalla stampa antiquaria, nel frattempo, mostrava profili biodegradativi molto simili, con attività protelitiche e lipolitiche più deboli rispetto a quei ceppi recuperati dagli altri campioni. La distribuzione delle attività idrolitiche degli isolati batterici è mostrata nella Tabella 3 e Fig. 6. I ceppi Bacillus di entrambe le fotografie di albume hanno mostrato attività simili perossidasi (0, 07-0, 1 U / ml) e attività catalasi molto elevate, dal 1257 U / ml di PA2_1_3 a 1340 U / ml della deformazione P1_1_5. Gli Actinobacteria dalla cornice della carta dell'album possedevano un'attività di catalasi più debole rispetto ai ceppi di Bacillus , con valori tra 436 U / ml per Streptomyces PF1_7 e 560 U / ml per Kocuria rhizophila PF1_1. L'altro isolato di Kocuria (PF1_Na_14) mostrava 0, 2 U / ml di attività perossidasi, il più alto dai batteri (Tabella 3).

Tabella a grandezza naturale

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Distribuzione delle attività idrolitiche di microrganismi isolati da diversi campioni. P1: foto di Gyula dall'archivio nazionale slovacco; PF1: cornice in carta dell'album della foto di Gyula; PA2: fotografia dell'antiquario.

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Diciannove ceppi fungini da un totale di 27 isolati hanno dimostrato almeno una proprietà biodegradativa. I funghi isolati dalle due fotografie dell'albume mostravano attività deboli nei confronti dei batteri. La Figura 6 mostra che solo il 15% degli isolati di stampa di Gyula possedeva attività proteolitica e che nessuno dei funghi isolati dalla fotografia di antiquariato lo faceva. Gli isolati fungini più attivi sono stati P1_6_Fu Bjerkandera adusta (con marcate attività lipolitiche e cellulolitiche), P1_15_Fu Pleurotus pulmonarius (caratterizzato da entrambe le capacità proteolitiche e cellulitiche) e PA2_6_Fu Aspergillus versicolor (attività lipolitiche medie e cellulolitiche).

Il sessantasette percento dei funghi isolati dalla cornice della carta dell'album mostrava attività proteolitica, ma solo il 44% era in grado di produrre lipasi e cellulasi (Fig. 6). I funghi Trichothecium roseum (PF1_ 2_Fu e PF1_Na_12_Fu) e Acrostalagmus luteoalbus (PF1_3_Fu e PF1_2_2_Fu) avevano le migliori proprietà idrolitiche, producendo una reazione positiva in tutti e tre i test biodegradativi (Tabella 3).

I funghi hanno mostrato attività perossidasi più forti rispetto ai batteri, molti dei quali eguagliano il miglior risultato batterico (0, 2 U / ml). Il P1_15_Fu Pleurotus pulmonarius e P1_Na_21_Fu Pleosporales sp. gli isolati sono aumentati, raggiungendo 0, 4 U / ml. I funghi con le più alte attività di catalasi sono stati isolati dalla fotografia di Gyula: P1_6_Fu Bjerkandera adusta , P1_13_Fu Chaetomium elatum , P1_Na_18_Fu Mucor plumbeus e P1_Na_21_Fu Pleosporales sp. esposto 350, 450, 600 e 500 U / ml, rispettivamente (Tabella 3).

Discussione

Le stampe all'albume hanno un importante valore storico e culturale, rappresentano le immagini di un'epoca, tra la fine del XIX e l'inizio del XX secolo, quando l'albume era il raccoglitore fotografico più popolare. Le fotografie di albumi sono conservate ed esposte in numerose gallerie, musei, biblioteche e archivi; è quindi fondamentale conoscere la loro composizione e le cause del loro biodegrado.

Le stampe su carta di albume erano preparate in diversi modi, ma in genere richiedevano l'uso di un supporto di carta molto puro e privo di metallo (i metalli potrebbero aver causato la comparsa di macchie nere nelle fotografie finali). L'albume, derivato dal bianco chiaro delle uova fresche, è stato miscelato con NaCl o NH 4 Cl. Il substrato di carta è stato quindi rivestito facendolo galleggiare in questa soluzione di albumina salata. Dopo l'essiccazione, la stampa su carta di albume è stata sensibilizzata spazzolandola con una soluzione AgNO 3 al 10%, che ha letto con il sale per formare l'AgCl insolubile sensibile alla luce. Quando questa carta sensibilizzata è stata esposta alla luce solare, un'immagine è stata formata dalla riduzione dell'argento sulla superficie di questi cristalli di AgCl, che sono stati incorporati nello strato di albume. La fotografia dell'albume è stata quindi lavata in acqua, stabilizzata in una soluzione di tiosolfato di sodio al 15% e nuovamente lavata 2 .

La composizione chimica delle fotografie esaminate qui non è particolarmente diversa da quelle analizzate nei lavori precedenti 12, 13, e questa indagine ha confermato l'utilità di FTIR e XRF per sondare in modo non invasivo tali materiali sensibili.

L'FTIR mostrava differenze tra il campione di controllo (F0) e le aree di foxing (F1 – F4) nell'intervallo 1736-960 cm 1 ; queste differenze potrebbero derivare da tre fonti: contaminazione microbica, impurità e prodotti di degradazione della stampa dell'albume. L'interpretazione di questi risultati è difficile perché i picchi dello strato di albume, del supporto di carta e della contaminazione biologica si sovrappongono. Sulla base dei risultati di Oberle-Kilic et al. 14, 15, 16 è ragionevole supporre che le differenze spettrali derivino da contaminazioni microbiologiche. Zotti et al. 17 hanno mostrato che la presenza di funghi attivi sulla carta può essere facilmente rilevata dall'analisi FTIR sulla base delle bande di ammide I e ammide II intorno a 1635 e 1540 cm −1 e un plateau tra 1500 e 1200 cm −1 . I nostri risultati FTIR hanno mostrato che l'albume produce uno spettro FTIR molto simile a quello dei funghi microfilamentosi (Fig. 4, spettro F0), rendendo impossibile attestare chiaramente la presenza di funghi sulla superficie dell'albume usando solo FTIR 18 .

L'analisi XRF ha permesso l'identificazione dei diversi elementi inorganici dai vari composti utilizzati durante la produzione delle stampe all'albume. Il solfato di bario e il biossido di titanio (rilevati nella fotografia di Gyula) sono stati utilizzati per vari scopi nei materiali fotografici, compresa la creazione di elementi decorativi su cornici di cartone 2 . La presenza di Si e Al, rilevata nella fotografia antiquaria, suggerisce che il caolino [Si 2 Al 2 O 5 (OH) 4 ] insieme al carbonato di calcio (CaCO 3 ) è stato usato per rivestire la carta 19 . Il bromo indica che i sali di bromuro (AgBr) sono stati utilizzati per la produzione della fotografia. Gli altri elementi, come lo zolfo e il ferro, sono stati rilevati anche in altri materiali fotografici esaminati in uno studio precedente 6 e la maggiore quantità di zolfo qui può anche indicare la presenza di prodotti di degradazione contenenti zolfo da albume o carta 20 . Cu, Mg e Zn sono probabilmente impurità. L'assenza di Ag nei punti di volpe pallida (XB e B) indica che era stato sbiadito durante l'elaborazione fotografica. La mancanza di metalli come Au, Pt e Se suggerisce che le due fotografie non fossero modificate 2 .

FTIR e XFR hanno entrambi dimostrato che le fotografie dell'albume sono una miscela di proteine, cellulosa e sali, che possono essere un substrato adatto per la colonizzazione microbica. Tale contaminazione biologica può talvolta essere osservata usando un normale microscopio ottico, come nel caso della fotografia di Gyula. Altri studi hanno precedentemente dimostrato i vantaggi dell'utilizzo di membrane per il campionamento di oggetti del patrimonio culturale 6, 21, 22 . L'analisi SEM di una membrana di nitrato di cellulosa eseguita qui ha rivelato la colonizzazione fungina e può essere considerata un'alternativa non invasiva agli strumenti SEM con camere di campionamento specializzate 6 .

Il confronto tra la microflora isolata di queste due stampe di albume e quelle di oggetti simili, ad esempio fotografie a base di gelatina 6, 7, 8, 9, 10, mostra che ci sono alcuni membri comuni dei generi Bacillo , Aspergillo e Penicillium . Diversi funghi, come il Pleurotus pulmonarius , Phlebia sp., Pleosporales sp. , Mucor plumbeus , Bjerkandera adusta , Chaetomium elatum , non erano stati precedentemente isolati su materiali fotografici, sebbene alcuni di essi fossero stati trovati su altri oggetti e in altri ambienti museali e archivistici 23, 24, 25, 26 . In particolare, Bjerkandera adusta era già stata isolata da una macchia di volpe su un libro del 19 ° secolo 23 .

C'è una connessione fisica tra la stampa dell'albume di Gyula e la cornice della carta dell'album e la membrana di campionamento ha sollevato i microrganismi e le spore che colonizzano entrambi i materiali, ma c'erano evidenti differenze microbiche tra questi due campioni; la cornice della carta dell'album aveva una diversa microflora batterica, caratterizzata da isolati di Kocuria e Streptomyces , a conferma dei risultati di studi precedenti relativi a film cinematografici, documenti storici e atmosfere archivistiche 4, 5, 7, 9 .

Per quanto ne sappiamo , Trichothecium roseum e Acrostalagmus luteoalbus non erano stati trovati in precedenza in questo tipo di habitat. I membri di questi due funghi hanno mostrato proprietà idrolitiche significative e attività di catalasi e perossidasi, indicando la loro capacità di degradare i substrati compositi, ma sfortunatamente non è stata trovata alcuna informazione sulle loro caratteristiche enzimatiche in letteratura. Le capacità idrolitiche e ossidoriduttive di altri funghi, come Bjerkandera adusta , Pleurotus pulmonarius e Mucor plumbeus , sono state confermate dalla nostra indagine e, di fatto, le diverse proprietà di biodegradazione di questi funghi hanno già trovato l'applicazione 27, 28, 29 . Ancora una volta, la coorte batterica ha mostrato pericolose attività lipolitiche, proteolitiche e cellulolitiche contro i beni del patrimonio culturale 30, 31, 32, sebbene queste attività possano essere sfruttate anche per applicazioni biotecnologiche 33 .

Le proprietà idrolitiche degli isolati in questo studio sono state integrate da attività di catalasi e perossidasi. In questo tipo di ambiente secco, gli enzimi ossidanti possono avere un duplice ruolo. In primo luogo, possono proteggere le cellule batteriche dallo stress ossidativo rimuovendo il perossido di idrogeno prodotto come sottoprodotto del metabolismo dell'ossigeno; infatti precedenti lavori hanno mostrato un aumento della produzione di catalasi e perossidasi in diversi tipi di microrganismi se coltivati ​​in condizioni carenti di acqua 34, 35, 36 . In secondo luogo, è stato recentemente stabilito che durante la biodegradazione dei materiali della cellulosa da parte dei funghi 37, 38 sono presenti ossidoriduttasi; infatti questa recente scoperta ha permesso di includere diversi enzimi ossidoriduttivi nel database degli enzimi carboidrati-attivi (CAZy) 39 . È quindi possibile concludere che anche le ossidoriduttasi sono coinvolte nel biodeterioramento e nei processi di biodegradazione a supporto degli enzimi idrolitici. Entrambi i ruoli suggeriscono che le elevate attività di catalasi e perossidasi degli isolati potrebbero aiutare questi microrganismi a colonizzare e utilizzare meglio il substrato contaminato.

Diversi studi precedenti 26, 32, 40 hanno dimostrato che una combinazione di metodi dipendenti dalla cultura e indipendenti fornisce una migliore caratterizzazione microbiologica rispetto a entrambi i metodi. In effetti, solo l'approccio indipendente dalla cultura è stato in grado di rilevare i membri di Geobacillus in tutti i campioni analizzati. La presenza di questi organismi termofili è stata sorprendente perché normalmente richiedono una temperatura di crescita compresa tra 45 e 70 ° C 41 . L'ipotesi più probabile è che i ceppi di Geobacillus abbiano contaminato i supporti di albume durante la loro preparazione. Diversi metodi sono stati usati per indurire gli strati di albume, tra cui la cottura a vapore e la conservazione delle carte rivestite di albume all'interno di un caldo fienile per un anno e mezzo 42 . La temperatura di un fienile può talvolta raggiungere i 50 ° C o più 43, fornendo un ambiente ottimale per la crescita dei ceppi di Geobacillus . Questi batteri sono stati rilevati anche sulla cornice di carta dell'album fotografico che era in contatto con la stampa di Gyula. Se la contaminazione di Geobacillus fosse intrinseca nella stampa di Gyula, la cornice della carta dell'album avrebbe potuto essere contaminata quando l'album fotografico fosse stato conservato in condizioni tali da consentire la crescita di questi microrganismi. I membri di Geobacillus sono stati rilevati anche nello strato di albume della fotografia antiquaria, facendo sembrare probabile che Geobacillus tendesse a colonizzare questi tipi di fotografie durante la loro fabbricazione. Questi microrganismi possono causare gravi problemi di deterioramento a causa delle loro note proprietà idrolitiche 41 .

I lattococchi erano il gruppo più diffuso nella stampa antiquaria e anche la loro presenza potrebbe essere collegata all'indurimento dello strato di albume di questa foto, forse all'interno di un fienile in cui è noto che i batteri dell'acido lattico partecipano alla fermentazione dell'insilato 43 .

Le microflore fungine rilevate nei tre campioni dall'approccio di clonazione DGGE sono complementari a quelle isolate per coltivazione. Sono stati trovati solo pochi collegamenti, vale a dire i ceppi di Aspergillus e Chaetomium , che sono stati rilevati da entrambi i metodi di indagine microbica rispettivamente nella stampa antiquaria e in quella di Gyula.

La cornice di carta dell'album fotografico mostrava la più bassa diversità di funghi; gli stessi membri fungini ( Nectria sp. e Malassezia sp.) sono stati rilevati sia nell'album che nella stampa Gyula, sebbene la comunità fungina della stampa dell'albume fosse più ricca, contenente molte altre specie, molte delle quali, Trichosporon , Geotrichum / Galactomyces , Chaetomium e Cladosporium , sono già stati trovati in materiali fotografici o documenti d'archivio 6, 10, 44, 45 . Sono state anche osservate specie fungine dei generi Nectria , Corynespora e Saccharomyces , che non sono state frequentemente riscontrate in ambienti archivistici. Diversi membri di Nectria e Corynespora sono agenti patogeni delle piante, quindi possiedono significative capacità lignocellulolitiche 46, 47 . I ceppi di Malassezia sono normalmente isolati dalle epidermidi o dal cuoio capelluto della pelle 48, quindi la loro presenza su questi campioni è probabilmente dovuta alla manipolazione del fotolibro nel tempo.

Tre particolari organismi eucariotici sono stati rilevati solo nella fotografia di albume antiquaria: Eurotium halophilicum, una specie xerofila precedentemente trovata negli oggetti d'archivio 21, 49, Trebouxia impressa e Gnomonia setacea . Le alghe del genere Trebouxia sono generalmente licheni fotobionti e non è sorprendente trovarli su superfici esposte ad altri tipi di ambienti 32, 50 ; sono stati recentemente identificati sull'autoritratto di Vinci 21 . Le specie di trebouxia sono tolleranti ai metalli pesanti e la loro presenza qui potrebbe essere dovuta alle tracce di diversi metalli trovati nella fotografia (questa proprietà ha anche portato al loro uso in applicazioni di disintossicazione 51, 52 ). La gnomonia setacea è una specie endofitica spesso isolata dagli alberi di Betula 53, ma attualmente non si sa molto sul loro potenziale idrolitico; per quanto ne sappiamo, i membri di questa specie non sono mai stati rilevati in oggetti e ambienti archivistici.

Conclusione

Solo pochi studi hanno analizzato fotografie di albume e, per quanto ne sappiamo, nessuno di loro ha trattato il biodeterioramento di questa parte importante del nostro patrimonio. La salvaguardia del nostro patrimonio culturale richiede metodi in grado di identificare i materiali da costruzione di oggetti storici e diagnosticare i potenziali biodeteriogeni al fine di sviluppare strategie mirate di conservazione e restauro. Questo studio ha illustrato un possibile armamentario di tecniche e approcci investigativi per l'analisi delle stampe di albume.

FTIR e XRF sono stati utili per analizzare i materiali fotografici e la composizione delle macchie di volpe. L'uso di membrane di nitrato di cellulosa per il campionamento della microflora sulla superficie delle fotografie e la loro successiva osservazione da parte del SEM fornisce una procedura semplice e non invasiva per acquisire un'idea preliminare dell'entità della contaminazione microbica. Lo sfruttamento di diversi tipi di media microbiologici ha permesso di isolare una diversa comunità microbica (in particolare i funghi). L'approccio di clonazione e sequenziamento insieme allo screening DGGE dei cloni ha rivelato specie diverse da quelle presenti nella sperimentazione sulla coltivazione. Questa combinazione di metodi dipendenti dalla cultura e indipendenti dalla cultura ha rivelato comunità microbiche complesse in tutti i campioni analizzati. Infine, i saggi enzimatici hanno permesso di identificare i microrganismi più deteriogenici.

metodi

Campioni

Due fotografie di albumi sono state oggetto di questa indagine. La prima fotografia (Gyula; P1) è datata 1889; è stato prodotto da un importante fotografo, Max Stern (1836–1901), ed è una delle 218 fotografie contenute nell'album fotografico ufficiale del distretto di Trenčin. È stato archiviato negli Archivi nazionali slovacchi dal 1991. La fotografia Gyula (Fig. 1) è circondata dalla cornice di carta dell'album fotografico (Gyula; PF1) ed è stata chiaramente colpita da una contaminazione microbica facilmente visibile; sulla sua superficie sono visibili diverse macchie di volpe. La fotografia di Gyula è stata offerta per essere investigata, prima di intraprendere vari trattamenti di conservazione, al fine di determinare potenziali contaminanti microbici. Solo i metodi non invasivi sono stati applicati a questa foto.

La seconda fotografia dell'albume è stata acquistata da un antiquario locale e portata in laboratorio in una borsa sterile. In questa foto di antiquariato (PA2) (Fig. 2) solo le macchie di volpe erano visibili ad occhio nudo. Questa fotografia "è stata sacrificata", usando metodi di indagine invasivi, al fine di comprendere meglio la contaminazione microbica delle foto di albume e confrontarla con la fotografia di Gyula.

Osservazione microscopica

Entrambe le fotografie sono state esaminate con un microscopio stereo (Olympus SZX9; Tokyo, Giappone) con ingrandimento 20–40 × e incidente di luce con un angolo di 45 °.

Una parte della membrana di nitrato di cellulosa da 25 mm utilizzata per il campionamento microbiologico della superficie della fotografia di Gyula (F4, area delimitata da un cerchio rosso, Fig. 1a) e una macchia di volpe (punto 2 nella Fig. 2a) ritagliata dalla fotografia antiquaria erano esaminato da SEM (Jeol JSM 6610, Tokyo, Giappone) utilizzando le strutture offerte dall'Istituto di materiali e meccanica delle macchine dell'Accademia delle scienze slovacca. Prima dell'osservazione SEM, i campioni sono stati irrorati con ioni d'oro.

spettroscopia μ-FTIR e ATR-FTIR

Gli spettri μ-FT-IR sono stati misurati usando la tecnica di riflessione totale attenuata usando un μ-FTIR-ATR Varian 610-IR (tecnologia Agilent, Santa Clara, USA), dotato di un beamsplitter Ge / KBr e ampliato con un microscopio Continuum e un rivelatore MCT raffreddato ad azoto liquido. Le misurazioni sono state eseguite a una frequenza di 20 kHz nell'intervallo 4000–600 cm −1 con una risoluzione di 4 cm −1, con una media di 400 acquisizioni per campione. Gli spettri sono stati elaborati dal programma Varian Resolution Pro (Agilent Technology). Quattro punti nella stampa Gyula con macchie di volpe (F1 – F4; Fig. 1a) sono stati analizzati mediante μ-FTIR. Il luogo F0, privo di danni apparenti, è stato trattato come controllo per determinare la tecnica fotografica. Una strategia simile è stata applicata alla fotografia di antiquariato in cui i punti 2-6 hanno evidenziato alterazioni della volpe e il punto 1 (Fig. 2a) è stato utilizzato per identificare la tecnica fotografica.

Gli spettri di riflettanza delle stampe di albume nella regione a infrarossi sono stati misurati anche su uno spettrometro Excalibur FTS 3000MX (Digilab, Randolph, USA) con un adattatore ATR contenente un cristallo di diamante. Le misurazioni sono state eseguite a una frequenza di 20 kHz nell'intervallo 4000–600 cm −1 con una risoluzione di 4 cm −1, con una media di 60 acquisizioni per campione. Gli spettri ATR sono stati elaborati dal programma Varian Resolution Pro (Agilent Technology).

Misurazione XRF

Le misurazioni XRF sono state eseguite in tre punti diversi (il cartone attorno alle fotografie e le macchie di volpe da siti chiari e scuri; Fig. 1a XA-XC; Fig. 2a A – C). Uno spettrometro XRF portatile è stato utilizzato per entrambe le fotografie (X-MET5100; Oxford Instruments, Abingdon, Regno Unito). Il tubo a raggi X funzionava con una tensione di 45 kV e una corrente di 40 mA, il tempo di scansione era di 60 se la risoluzione spettrale era di 150 eV.

Campionamento e isolamento della microflora

Una membrana sterile di nitrato di cellulosa da 25 mm (Sartorius, Gottinga, Germania) è stata premuta su una sezione contaminata della parte dell'albume della fotografia di Gyula e una seconda membrana è stata premuta sul telaio della carta dell'album (Fig. 1a cerchi rossi).

Il campionamento della stampa di albume antiquario (PA2) è stato eseguito tagliando un pezzo della fotografia (Fig. 2a, punto 3). Questo pezzo di albume è stato sospeso in 2 ml di soluzione fisiologica; dopo vortice, 200 ml della sospensione risultante sono stati placcati nello stesso tipo di mezzo di agar come nell'approccio a membrana descritto di seguito. Il resto della sospensione, compresi i frammenti di fotografia, è stato utilizzato per l'estrazione del DNA.

Ogni membrana è stata tagliata in cinque pezzi: un pezzo è stato usato per l'osservazione SEM (vedi sopra), 3 pezzi sono stati usati per la coltivazione e un pezzo è stato usato per l'estrazione del DNA (vedi sotto).

La coltivazione è stata effettuata in due modi diversi: (i) inoculo diretto, due pezzi di membrana di ciascun campione sono stati posti su piastre di agar Luria Bertani (LB10) 10 × diluite per batteri e su Mar (MEA) per funghi; (ii) nell'approccio con membrana, un diverso pezzo di membrana per ciascun campione è stato sospeso in soluzione fisiologica, diluito 10 volte e placcato su piatti di agar specifici per la crescita di batteri o funghi. Per l'isolamento batterico, l'approccio con membrana ha utilizzato R2A (Oxoid, Basingstoke, UK), LB10 e agar gelatina con NaCl al 3% (R2A-Gel-NaCl); per l'isolamento fungino, il metodo ha usato la dicloran rose Bengal Chloramphenicol (DRBC; Hi-Media, Bombay, India), MEA (Hi-Media) e R2A-Gel-NaCl. Il mezzo di gelatina è stato preparato usando agar R2A (Oxoid, Basingstoke, UK) più NaCl al 3%. Questo mezzo è stato sterilizzato in autoclave separatamente e quindi è stato aggiunto lo 0, 4% di gelatina sterilizzata (Sigma-Aldrich, Germania) insieme alla quantità di MgSO 4 (autoclavato separatamente) del 20% necessaria per raggiungere una concentrazione finale di MgSO 4 del 2%. Tutte le piastre batteriche e fungine sono state incubate a temperatura ambiente (22-26 ° C) per cinque giorni a 2 settimane. I media di agar sono stati integrati con actidione (50 mg l −1 ; Fluka, Seelze, Germania) o cloramfenicolo (50 mg l −1 ; Sigma – Aldrich, Seelze, Germania) per evitare rispettivamente la crescita di funghi e batteri.

Estrazione del DNA da microflora isolata e identificazione

I microrganismi sono stati selezionati sulla base della diversa morfologia e trasferiti su nuove piastre di agar per ottenere colonie pure. Gli isolati fungini purificati sono stati mantenuti su inclinazioni Sabouraud (SAB), i batteri su piastre di Tryptone-Soya Agar (TSA; Oxoid). Per l'estrazione del DNA da ceppi fungini, gli isolati sono stati inoculati nel brodo SAB a 28 ° C fino alla crescita; sono stati quindi separati dal brodo mediante filtrazione attraverso carta da filtro sterile, seguita dall'estrazione del DNA con il mini kit di DNA fungino di Ron (Bioron, Ludwigshafen, Germania), secondo le istruzioni del produttore. La regione ITS dell'rDNA è stata amplificata con i primer ITS1 (5′-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3 ′) e ITS4 (5′-TCC TCC GCT TAT TGA TAT T-GC-3 ′) 54 . La miscela di 25 μl di PCR conteneva 50 pmol di ciascun primer, 200 μmol l −1 di dNTP (Life Technologies, Gaithersburg, Maryland, USA), 1, 5 U HotStar Taq più DNA polimerasi (Qiagen, Hilden, Germania), 1 × PCR buffer e 3 ml di DNA estratto (il modello PCR). Il programma PCR consisteva in una denaturazione iniziale a 94 ° C per 5 minuti, seguita da 30 cicli (denaturazione a 94 ° C per 30 secondi, ricottura a 54 ° C per 45 secondi, estensione a 72 ° C per 1 minuto) e un fase finale di polimerizzazione a 72 ° C per 10 min.

Per l'estrazione del DNA dai batteri, fresche colonie batteriche sono state raccolte dalle piastre TSA e il loro DNA è stato isolato usando InstaGene Matrix (Biorad, Hercules, CA, USA) seguendo le istruzioni del produttore; questo DNA estratto è stato quindi utilizzato come modello PCR. Gli isolati batterici sono stati identificati mediante sequenziamento parziale dell'rDNA 16S usando PCR con i primer 27f (5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 ′) e 685r (5′-TCT ACG CAT TTC ACC GCT AC-3 ′) 55 ; le condizioni e il programma di PCR erano gli stessi della procedura ITS.

I prodotti PCR risultanti da ceppi di funghi e batteri sono stati purificati con ExoSAP-IT (Affymetrix, Cleveland, Ohio, USA) e sequenziati in una struttura commerciale (GATC-Biotech, Costanza, Germania). Le sequenze risultanti sono state confrontate direttamente con quelle di GenBank usando il programma Blast (//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) e sono state successivamente depositate in GenBank con i numeri di accesso KT200239 – KT200250 (isolati batterici) e KT200251– KT200277 (isolati fungini).

Estrazione totale del DNA e 16S rRNA, amplificazione del gene 28S rRNA

Il DNA microbico totale è stato estratto mediante estrazione in fase solida caotropica (DNeasy Blood & Tissue Kit; Qiagen) dalle restanti membrane di nitrato di cellulosa (dalla foto di Gyula e dalla sua cornice di carta circostante) e dalla sospensione contenente i frammenti di fotografia di antiquariato (punto 3 nella Fig. 2a) dal protocollo descritto da Bučková et al. 6

I frammenti di rDNA 16S batterici e di rDNA 28S eucariotici sono stati amplificati in due fasi. Il primo passo ha coinvolto i primer 27f e 685r orientati verso il gene batterico dell'rRNA 16S. Per l'amplificazione del gene eRary 28S rRNA, sono stati utilizzati i primer universali NL1 (5′-GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG-3 ′) e NL4 (5′-GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3 ′) 56 . Le 25 μl di miscele di PCR contenevano 50 pmol di ciascun primer, 2, 5 mmol l −1 MgCl 2, 200 μmol l −1 di dNTP, 1, 5 U HotStar Taq più DNA polimerasi (Qiagen), 1 × PCR buffer e 3 μl (4.2–8.45 ng μl −1 ) di DNA estratto. La PCR è stata eseguita con una fase iniziale di denaturazione di 5 minuti a 95 ° C seguita da 35 cicli di denaturazione a 94 ° C per 30 s, ricottura a 54 ° C (amplificazione del gene rSNA 16S) e a 56 ° C (amplificazione di 28S gene rRNA) per 1 minuto ed estensione a 72 ° C per 1 minuto, successivamente seguita da una fase di estensione di 10 minuti a 72 ° C. Per ciascun target del DNA, sono state prodotte quattro reazioni di 25 μl (100 μl in totale). Le quattro reazioni di ciascun bersaglio del DNA sono state mescolate insieme e la specificità dell'amplificazione è stata controllata mediante elettroforesi su gel di agarosio. Una parte di questi prodotti PCR è stata riservata alla costruzione di librerie di cloni (vedi sotto).

Analisi dell'impronta digitale dell'elettroforesi su gel gradiente denaturazione

Il resto del prodotto PCR della prima fase (1 μl) è stato usato come modello nella seconda fase di amplificazione, una PCR semi-annidata per ciascun target di DNA. Il gene 16S rRNA è stato ri-amplificato con primer 518f (5′-CCA GCA GCC GCG GTA AT-3 ′) e 685r-GC (5′-CGC CCG CCG CGC GCG GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GTC TAC GCA TTT CAC CGC TAC-3 ′); i primer NL1f-GC (5′- CGC CCG CCG CGC GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GGC ATA TCA ATA AGC GGA GGA AAA G-3 ′) e LS2 (5′- ATT CCC AAA CAA CTC GAC TC-3 ′) Sono stati usati per l'amplificazione semi-nidificata del gene rSNA 28S. Le condizioni della PCR erano le stesse di cui sopra. L'elettroforesi su gel gradiente denaturazione (DGGE) per ampliconi batterici ed eucariotici è stata eseguita come descritto da Pangallo et al. 57 per produrre profili di fingerprinting DGGE delle comunità batteriche ed eucariotiche.

Costruzione di librerie di cloni e proiezione di cloni

Le librerie di cloni sono state prodotte da una parte dei prodotti PCR dal primo passaggio di amplificazione della PCR seguendo un protocollo 57 precedentemente descritto. In breve, i prodotti PCR sono stati purificati con il kit di purificazione QIAquick PCR (Qiagen), legati in un vettore pGEM-T Easy (Promega, Madison, Wisconsin, USA), trasformati in E. coli XLI-Blue e distribuiti su piastre di Luria Bertani con 100 μg ml −1 ampicillina 0, 1 mM, X-Gal e 0, 2 mM IPTG. Per confermare la presenza degli inserti desiderati, sono state raccolte 100 colonie bianche di ciascuna libreria di cloni e direttamente schermate PCR per la presenza degli inserti utilizzando i primer specifici per vettore SP6 e T7 57 . I cloni positivi di ciascuna libreria sono stati analizzati usando la procedura DGGE semi-nidificata descritta sopra. I profili dei singoli cloni sono stati confrontati tra loro e con quelli dell'intera comunità. Un diagramma che delinea schematicamente la clonazione completa e la strategia di screening DGGE è mostrato nella Figura supplementare S1. I prodotti PCR di cloni con profili diversi sono stati sequenziati al fine di identificare i microrganismi che colonizzano le stampe dell'albume. Per sequenziare questi prodotti, sono stati prima purificati con ExoSAP-IT (Affymetrix, Cleveland, USA) e sequenziati utilizzando il primer SP6 da una struttura commerciale (GATC Biotech, Costanza, Germania). Per l'identificazione dei microrganismi, le sequenze sono state confrontate direttamente con quelle in GenBank usando il programma blast (//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Queste sequenze sono state depositate in GenBank con i numeri di adesione KT200278 – KT200296 (cloni batterici) e KT200297 – KT200316 (cloni eucariotici).

Saggi idrolitici, attività di catalasi e perossidasi

Diversi test su piastra di agar sono stati applicati per valutare le capacità proteolitiche (agar R2A-Gel), cellulolitiche (agar rosso Congo) e lypolitic (agar blu spirito) di ceppi isolati come descritto da Šimonovičová et al. 58 Le piastre di agar R2A-Gel sono state preparate miscelando l'agar R2A (Oxoid) sterilizzato in autoclave con lo 0, 4% di gelatina sterilizzata (Sigma – Aldrich, St. Louis, USA). L'agar Rosso-Congo conteneva 0, 5 g KH 2 PO 4, 0, 25 g MgSO 4, 2 g di cellulosa, 0, 2 g Rosso-Congo, 2 g di gelatina e 15 g di agar in 1 l di acqua distillata a pH 6, 8–7, 2. L'agar Spirit Blue è stato preparato sospendendo 32, 15 g di agar Spirit Blue (Himedia) in 1000 ml di acqua distillata, sterilizzata in autoclave, raffreddata a 50 ° C e integrata con 30 ml di substrato lipasi (1 ml di Tween 80, 400 ml di distillato caldo acqua e 100 ml di olio d'oliva; sterilizzati in autoclave). Questo è stato lentamente miscelato e versato in piastre di Petri. Tutti i prodotti chimici, se non diversamente specificato, sono stati acquistati da Sigma – Aldrich. Tutti i test sono stati eseguiti in triplicato utilizzando piastre da 60 mm incubate a temperatura ambiente (22-26 ° C) generalmente per 3-7 giorni.

L'attività della catalasi (CAT; EC 1.11.1.6) è stata determinata spettrofotometricamente a pH 7, 0 monitorando la decomposizione di H 2 O 2 a 240 nm con un coefficiente di estinzione di 43, 6 M −1 cm −1 . Un'unità (1 U) di attività della catalasi è stata definita come la quantità di enzima che catalizza la decomposizione di 1 μmol di H 2 O 2 al minuto 59 .

L'attività della perossidasi (POX; EC1.11.1.7) è stata analizzata spettrofotometricamente a pH 5, 5 monitorando l'ossidazione dell'o- dianisidina dicloridrato a 460 nm (ε460 nm = 11, 3 × 103 M −1 ). Un'unità di attività perossido (U) è stata definita come la quantità di attività che produce 1 μmol di o -dianisidina ossidata al minuto 60 .

Informazioni aggiuntive

Come citare questo articolo : Puškárová, A. et al. Comunità microbiche che influenzano il patrimonio fotografico dell'albume: un'indagine metodologica. Sci. Rep. 6, 20810; doi: 10.1038 / srep20810 (2016).

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